آلوکولر حیاتیات میں، مختلف ڈی این اے تناسب کے اقدامات کے لئے اچھے بفر کی پسند اور تیاری میں پروٹین اظہار پر منتقل یا ایک اور زیادہ سے زیادہ مینی پریپ کی کٹ کو کھولنے کے لۓ فرق ہوسکتا ہے. ان کے اہم اہمیت کے باوجود، بفر کی ترکیبیں اکثر ایسے ہیں جو مختلف اجزاء کے لئے تشریح یا منطق کے بغیر لکھی جاتی ہیں. اس طرح کے ایک بفر گلوکوز ٹریس- EDTA یا GTE بفر ہے.
$config[code] not foundکے لئے استعمال کیا GTE کیا ہے؟
جی ٹی ای کے اندر خلیات (کھولنے والے) کو خالی کرنے اور پلاسمی ڈی این اے کے اندر بیکٹیریل سیل چھروں کو دوبارہ شروع کرنے کے لئے استعمال کیا جاتا ہے. لیونزیم، جو سیل جھلیوں کو نرم کرتا ہے، اکثر GTE بفر کے ساتھ شامل ہوتا ہے. اس مرحلے کے دوران پورے خلیات کے ایک معطلی معطلی کو حاصل کرنا تاکہ اس طرح کے اضافی lysis حل تمام خلیوں کو حاصل ہوسکتا ہے تاکہ اچھے ڈی این اے کی پیداوار حاصل ہو. جی ٹی ای کو ڈی این اے کے لئے ایک مستحکم ماحول بھی فراہم کرتے وقت اس کے لئے ڈیزائن کیا گیا ہے.
Osmolarity کے لئے گلوکوز
50 ملی میٹر (ملییمالر) گلوبل گیس میں شامل کیا جاتا ہے تاکہ آتمولوریت کو برقرار رکھنے کے لئے جہاں خلیوں کے باہر سوراخ کرنے والی تنصیب خلیات کے اندر اندر ہے. یہ قبل از کم سیل لیزس کو روکتا ہے، جس میں ڈی این اے کی پیداوار کو مجموعی طور پر اجنبی اور کمی کی وجہ سے کم ہوسکتا ہے. بفر کے دیگر اجزاء حل کے آلوسولرتا میں بھی حصہ لیتے ہیں، لیکن گلوکوز، غیر الیکٹروائٹی، ایک اچھا انتخاب ہے کیونکہ یہ حل کے بفر کی خصوصیات میں مداخلت نہیں کرتا.
پی ایچ ٹی کی استحکام کے لئے Tris
ٹیس ٹیس (ہائڈیکسکسمیتیل) امینومیتین کے لئے مختصر نام ہے، جو ایک بہت عام پی ایچ اے بفر ہے. GTE بفر کے معاملے میں، ایسڈ نمک (Tris-HCl) بفر میں 25mM کی حدود میں شامل کیا جاتا ہے. یہ پلازیدڈ ڈی این اے کے ایسڈ ہائیڈرولیسیس (ڈراگریشن) کو روکنے اور دیگر سیل اجزاء کے ناپسندی کی جانب سے ردعمل کی روک تھام کے لئے ایک جسمانی 8.0 میں ایک مثالی پی ایچ او حل کے پی ایچ کو برقرار رکھتا ہے.
EDTA ڈی این اے کی تباہی کو روکتا ہے
EDTA، یا ethylenediaminetetraacetic ایسڈ، قبضہ یا حل کے باہر "chelates" دھات آئنوں، ان ناپسندیدہ طرف ردعمل میں حصہ لینے سے روکنے کے. GTE بفر میں، EDTA 10mM میں شامل کیا جاتا ہے. اس کا بنیادی مقصد بفر میں مفت زنک، میگنیشیم اور کیلشیم کو دور کرنے کے لئے ہے، اس طرح اس طرح کے دھاتوں کی ضرورت ہوتی ہے جو کچھ راستے سے ڈی این اے کی کمی کو روکنے کے.
کچھ اہم تجاویز
اپنے GTE بفر کو ٹھنڈا رکھیں اور اس میں غیر معمولی بیکٹیریا کی ترقی کو روکنے کے لۓ چھوٹی سی مقداریں بنائیں. شوگر اور کنٹرول پی ایچ ڈی ایک بہت بڑا ترقی کے ذریعہ بناتا ہے. ہمیشہ پاک پانی کا استعمال کریں. ٹیپ پانی پائپ سے دھاتی آئنوں سے زائد ہوسکتی ہے، جو اسے EDTA کی صلاحیت پر قبضہ کر سکتا ہے. اگر آپ کو اپنے نمونے میں آر این اے مداخلت کی موجودگی پر شبہ ہے تو، مسئلہ کو ختم کرنے کے لئے اپنے GTE بفر میں RNase A فی 100 مائکروگرام پر ملائیں.
